DIA定量蛋白組學
基于MRM/SRM/PRM的靶標蛋白質組學,可以為幾十到上百個目標蛋白提供精確的絕對定量結
果,并且重復性很高,是質譜絕對定量的金標準。 但通量相對較低,無法開展高通量蛋白的精確定量。
DIA技術(data-independentacquisition , 數據非依賴采集)融合了傳統蛋白質組shotgun的高通量和質譜絕對定量金標準PRM的定量精確的優點,被NatureMethods雜志評為2015年最值得關注的技術。


技術原理
傳統的蛋白質組技術shotgun、 Label free、 iTRAQ/TMT等在數據采集過程中存在較高的數據丟失和采集的隨機性即DDA(data-dependent acquisition)的采集方式。 在這個采集過程中,每個掃描周期內,質譜只對豐度最高的信號( —級質譜top20)進行二級信號采集(二級質譜),其余信號的二級信號則丟失了(如果沒有二級信號,就無法知道這個信號是什么蛋白質,也就沒有意義了)。
而DIA(data-independent acquisition)技術原理是將所有的信號預先劃分為幾塊,然后對每塊區域里面的所有—級信號,全部—次性進行二級采集。從而實現了高度的覆蓋性,以及在此基礎上的高度重現性。

DIA模式下的信號采集窗口展示


項目流程圖



技術路線


DIA技術優勢
1.定量鑒定復雜的樣品中所有分子,包括低表達蛋白和低豐度的被修飾蛋白;

2定量準確度高:定量準確度與PRM技術相當;

3通量大:—次實驗可定量檢測到2000種以上蛋白;

4完整全面信息存儲,存儲所有檢測分子的MS, MS/MS每個峰值的數據,無需重復檢測同一樣品。


樣本要求

腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉、皮膚等常規動物組織,標記定量蛋白質組推薦送樣量>200 mg(總蛋白量>200μg);非標定量蛋白質組推薦送樣量>50 mg(總蛋白量>20μg)修飾蛋白質組推薦送樣量>500 mg(總蛋白量>5mg)。

幼嫩的根、葉、花、愈傷組織等常規植物組織,定量蛋白質組推薦送樣量>1g;修飾蛋白質組推薦送樣量>2 g。

血漿/血清樣本,定量蛋白質組推薦送樣量>200 μl。

懸浮/貼壁細胞,定量蛋白質組推薦送樣量>1×10^7個細胞或體積>50μl細胞沉淀;

磷酸化蛋白質組推薦送樣量>5×10^7個細胞或體積>200μl細胞沉淀;

乙?;?、泛素化蛋白質組>1×10^8個細胞或體積>500μl細胞沉淀。

琥珀?;?、丙?;鞍踪|組>1×10^8個細胞或體積>500μl細胞沉淀。

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